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心血管解剖取材固定方法

[ 时间:2024-07-24 阅读:136次 ]

本节以大鼠、小鼠为例,介绍心脏、血管的解剖取材及固定方法。

一、灌注固定法

大鼠麻醉后,将四肢用皮筋固定于动物取材板上,颈静脉采血后剪开胸腔,暴露出心脏。先用注射器抽取生理盐水向左心室或从左心室向主动脉方向穿刺,一边缓慢注入生理盐水,一边在右心耳剪口放血,冲洗至无血液流出时,再缓慢注入10%中性甲醛液(或4%多聚甲醛液),注意不要移动针头,必要时可结扎固定针头,直至固定液分布到全身,可见脏器由红色变白色或触摸时脏器变硬,注入速度一般控制在20~30ml/15~20min 液体(注意:AS模型灌注时要特别小心或改用浸泡固定法),分离取出心脏放入固定液中再继续固定24~48h(图3-3-1~图3-3-3)。

图3-3-1~2.jpg

图3-3-3.jpg

二、浸泡固定法

将心脏、血管取出后直接放入固定液中,固定24~48h。如血液太多,可再更换一次新配的固定液(浸泡固定适用于大批量取材,取材立即固定,取材结束后再更换一次固定液)。固定液是组织体积的30~50倍,固定液容器大一些便于振动,振动固定更有利固定液均匀渗透和防止组织与容器底粘连阻碍渗透。

三、心脏、血管解剖取材与固定方法

(一)心肌梗死大鼠模型取材

心肌梗死大鼠及对照组大鼠测定完心功能后麻醉处死,剖开胸腔从主动脉根部离断取出心脏,梗死处心肌色泽苍白,用生理盐水稍洗,立即放入10%中性甲醛液固定24~48h。

(二)动脉粥样硬化ApoE小鼠心脏取材

处死ApoE小鼠,剖开胸腔暴露出心脏,用少量生理盐水洗除心腔内积血,紧贴升主动脉根部离断心脏,立即放入10%中性甲醛液固定24~48h。

(三)高血压大鼠心脏取材

麻醉处死大鼠,剖开胸腔用解剖镊子夹住心脏根部血管,轻轻提起仔细剪开心包膜,用小解剖剪分离取出心脏,10%中性甲醛液固定24~48h。

(四)主动脉解剖取材与固定方法

麻醉处死大鼠、小鼠,剖开胸腹腔暴露出心脏,先沿着主动脉方向剥离胸主动脉,往下继续剥离腹主动脉,将血管平展于滤纸上,放入10%中性甲醛液固定24~48h。

(五)颈动脉解剖取材与固定方法

麻醉处死大鼠、小鼠,轻轻分离开颈部肌群暴露出颈动脉,将颈动脉与周围肌肉结缔组织一并取出,平展于滤纸上,放入10%中性甲醛液固定24~48h(图3-3-4,图3-3-5)。

图3-3-4~5.jpg

四、心脏血管固定后取材方法

(一)心肌梗死大鼠心脏

固定后取材,将整个心脏修切成0.3cm片状,从心耳下到心尖部横切面,放入包埋盒进行脱水。注意肉眼观察,固定后梗死处心肌色泽苍白,梗死区范围大小、色泽、质地。并用绘简图方法说明取材的部位,为在显微镜下观察做好大体病变区的“标记”。

(二)动脉粥样硬化ApoE小鼠心脏

从心耳下将心脏切成0.3cm 厚的横断面,进行脱水包埋,如要观察主动脉根部及主动脉瓣等截面,应将心脏升主动脉切面向下包埋。

(三)高血压大鼠心脏

固定后从心耳下横断面剖切开心脏,切取0.3cm厚的横断面进行脱水包埋。大鼠、小鼠心脏除以上横断面取材方法之外还可纵断面取材,同时观察心房与心室。

(四)主动脉、颈动脉

切取胸主动脉和腹主动脉0.3cm厚的横断面进行脱水包埋,根据需要也可将主动脉纵断面取材包埋。颈动脉很小不易区分与周围结缔组织共修成横断面包埋(图3-3-6~图3-3-14)。

图3-3-6~7.jpg

图3-3-8~13.jpg

图3-3-14.jpg

(五)注意事项

在分离大鼠、小鼠血管时,血管周围结缔组织不必分离干净,有血管周围结缔组织附着包埋起支撑作用,更有利于血管腔面的直立包埋,确保切片血管腔的完整性,同时可更好观察血管内、外膜全层病变结构变化。此外,取材时还要注意使血管腔呈圆形不要呈闭合状(表3-3-1)。

表3-3-1.jpg



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