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实验动物血和体液的采集

[ 时间:2024-05-31 阅读:130次 ]

一、采血

实验动物的采血方法很多,不同种系动物的采血方法不同。采血方法的选择,主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。

1. 尾尖采血 常用于大鼠、小鼠,采血量很少,1~2滴。动物固定露出尾巴,用酒精擦拭尾尖使血管扩张后剪去尾尖约1cm(或划破尾尖血管),取血后用脱脂棉止血。

2. 眼眶静脉丛采血 常用于大鼠、小鼠的常规血液检查。左手固定动物后,向动物眼内滴入少量10%可卡因,右手持消过毒并吸有抗凝药的毛细管刺入眼睑和眼球之间,刺入的同时稍稍旋转,达到一定深度血液即可流出。采血后用消毒纱布压迫眼球止血30s。

3.腹主动脉采血 常用于大鼠、小鼠。将动物麻醉,仰卧位固定。打开腹腔,将肠管推向一侧,然后用手指轻轻分开脊柱前的脂肪,暴露出腹主动脉,用针管在腹主动脉分叉处与血管平行刺入,回抽采血。此方法采血量较大。

4.心脏采血 可用于多种动物。将动物麻醉,仰卧位固定,胸部消毒后用手指触探心脏搏动位置,从肋骨间隙进针,轻轻回抽注射器,有血液流出即可。

5.兔耳缘静脉采血 兔首位固定,头稍向下倾,用酒精擦拭耳缘,使血管扩张,左手压住耳缘静脉阻止血流,针尖刺入静脉,松左手抽血,采血完毕用消毒棉球止血。

6.兔的颈动脉采血 动物麻醉后仰卧位固定,将兔颈部去毛,消毒,解剖暴露颈动脉,先结扎动脉的远心端并在近心端放一缝合线,在缝线处用动脉夹阻断颈动脉,在结扎线和近心端缝线之间剪开血管呈V字形,将导管向心脏方向插入,用缝线将导管与血管结扎,导管另一端放入采血容器,缓慢松开动脉夹。

7.犬后肢外侧小隐静脉和前肢内侧皮下头静脉采血 侧卧保定或固定在手术台上,剪去抽血部位的毛,消毒。左手拇指和食指握紧剪毛区上部,使下肢静脉充盈,右手持针迅速刺入静脉,左手放松将针固定,抽血。每只犬一般采血10~20ml。也可在耳缘静脉和颈静脉采血。

8.猴颈静脉、指尖、足跟、后肢皮下静脉采血 将猴保定(颈静脉采血时侧位绑定,头部略低于台面),取血处去毛、消毒,左手拇指于近心端压迫静脉,静脉怒张后右手持针取血。

9.小型猪耳大静脉、后肢静脉、颈静脉采血 颈静脉采血时,仰卧保定,两前肢张开使其和胸骨柄前端的左右侧形成三角形的凹陷部,消毒,针头从三角形底边向正中线斜后方刺入采血。

表1-6-1 不同动物最大安全采血量和最小致死采血量

表1-6-1 不同动物最大安全采血量和最小致死采血量.jpg

采血注意事项:

(1)采血场所应光线充足,室温保持在夏季25~28℃、冬季15~20℃为宜。

(2)采血用具及采血部位一般需要进行消毒。

(3)采血用注射器和试管保持清洁干燥。

(4)若需抗凝全血,在注射器或试管内需预先加入抗凝药。

(5)所需采血量应控制在动物的安全采血量范围内。一次采血过多或连续多次采血都可能影响动物健康,甚至导致贫血或死亡。实验动物最大安全采血量和最小致死采血量见表1-6-1。

二、采 集 体 液

1.胸水的采集 实验动物胸水采集主要利用胸膜腔穿刺术。先准备好普通注射针头、穿胸套管针、注射器等器械。大、中动物应麻醉,小动物应侧卧保定。术部剪毛消毒后,左手将术部皮肤向侧方移动,右手持穿刺套管针,在紧靠肋骨前缘处垂直刺入,穿刺肋间肌时有一定阻力,当阻力消失有针落空感,表明刺入胸腔,即可抽取胸水。穿刺部位:犬在左侧第8肋间或右侧第7肋间。穿刺时应避免损伤肋间血管和神经。

2.腹水的采集 主要利用腹腔穿刺术。动物取立位保定。穿刺点在腹下剑状软骨后方,旁开正中线小动物在脐稍后正中线侧方1~2cm处。穿刺时,先将穿刺部位剪毛消毒,再将皮肤稍向一侧移动,用注射器或穿刺套管针与腹壁垂直刺入。针尖有落空感后,腹水将自行流出。如若腹水量较大,应缓慢地间歇地抽出,以免腹内压突然下降而致使动物发生循环功能障碍。采完腹水后用碘酊棉球消毒。

3.消化液的采集 主要消化液有唾液、胃液、胆汁、胰液等。

(1)唾液的采集:一般采用刺激法。通过食物的颜色、气味等刺激动物的视觉、嗅觉而致动物唾液分泌增加,再通过引入导管采集。

(2)胃液的采集:同样通过刺激,使胃液分泌增加,采用插胃管的办法抽取胃液。

(3)胆汁的采集:需要进行手术。将动物麻醉仰卧于实验台,在剑突下正中线做3~5cm的切口,切开腹膜,暴露腹腔,将肝脏向上翻起,找出胆囊(十二指肠与胃交界处,有一暗绿色的囊,注意大鼠没有胆囊,而由几根肝管汇集成肝总管和胰管一起汇成胆总管,开口于十二指肠),并分离出胆囊或胆总管,再用注射器抽取胆汁。

(4)胰液的采集:基本方法同胆汁的采集。在胆总管和十二指肠交界处分离出胆总管,小心操作勿刺激胰腺分泌。分离后在靠肠端结扎,作为牵引线,用眼科剪在管壁上斜开一小口,插入准备好的胰液收集管(一般用聚乙烯塑料软管,内径 2mm,长 10cm,并将其拉成内径 0.05mm 的细管,剪成一端斜口,在粗细交界处绕3~4圈,用0号合线),收集于容器内。

4.尿液的采集 方法较多,一般在实验前需给动物灌服一定量的水。

(1)代谢笼法:此法较常用,适用于大鼠,小鼠。将动物放在特制的代谢笼内。动物排便时,可以通过笼子底部的大小便分离漏斗将尿液与粪便分开,达到收集尿液的目的。由于大鼠、小鼠尿量较少,操作中损失和蒸发,各个鼠膀胱排空不一致等原因,都可造成较大的误差,因此一般需收集5h 以上的尿液,最后取平均值。

(2)导尿法:常用于雄性兔、犬等,动物轻度麻醉,固定于实验台上,由尿道插入导尿管(顶端涂抹液体石蜡),可以采到没有受到污染的尿液。

(3)压迫膀胱法:在实验研究中,有时为了某种实验目的,要求间隔一定的时间,收集1次尿液,以观察药物的排泄情况。动物轻度麻醉后,实验人员用手在动物下腹部加压,手要轻柔而有力。当加的压力足以使动物膀胱括约肌松弛时,尿液会自动排出。此法适用于兔、猫、犬等较大动物。

(4)输尿管插管法:动物麻醉后,固定于实验台上。剪毛、消毒、在耻骨联合上缘之上正中线做皮肤切口(长为 3~4cm),沿腹白线切开腹壁及腹膜,找到膀胱翻出腹外。辨认清楚输尿管进入膀胱背侧的部位(即膀胱三角)后,仔细分离出两侧输尿管,分别在靠近膀胱处穿线结扎,在离此结扎点约2cm处的输尿管近肾段下方分别穿1根丝线。用眼科剪在管壁上剪一斜向肾侧的小切口,分别插入充满生理盐水的细塑料管(插入端剪成斜面),用留置线结扎固定。可见到尿滴从插管中流出(前几滴是生理盐水),塑料管的另一端与带刻度的容器相连或接在记滴器上,以便记录尿量。在实验过程中应经常活动一下输尿管插入管,以防阻塞,切口和膀胱处应盖上温湿的生理盐水纱布。

(5)膀胱插管法:腹部手术同输尿管插管。将膀胱翻出腹腔后,用丝线结扎膀胱颈部,阻断尿道。然后在膀胱顶部避开血管剪一小口,插入膀胱漏斗,用丝线做荷包缝合结扎固定。漏斗最好正对着输尿管在膀胱的入口处。注意不要紧贴膀胱后壁而堵塞输尿管。下端接橡皮管插入带刻度的容器内以收集尿液。

(6)膀胱穿刺法:动物麻醉后固定于实验台上,在耻骨联合之上腹正中线剪毛,消毒后进行穿刺,入皮后针头应稍改变一下角度,以避免穿刺后漏尿。

(7)剖腹采尿法:同穿刺法做术前准备,皮肤准备范围应大一点。剖腹暴露膀胱,操作者的左手用无齿镊夹住一小部分膀胱壁,右手持针在小镊夹住的膀胱部位直视穿刺抽取尿液。可避免针头贴在膀胱壁上而抽不出尿液。

(8)反射排尿法:适用于小鼠,因小鼠被人抓住尾巴提起时排尿反射比较明显。采少量尿液时,可提起小鼠,将排出的尿液接到带刻度的容器内。

5.骨髓的采集 大动物骨髓的采集通常用活体穿刺法,多为胸骨、肋骨、股骨等骨的骨髓。小动物因骨骼较小,不易穿刺采集,多用处死后采集的办法,一般采集胸骨和股骨骨髓。

三、采粪

1.大鼠、小鼠 使用代谢笼。另外,仰卧固定时,会排出少量粪便。

2.兔 采集少量新鲜粪便时,兔仰卧,用手托住臀部,大拇指压迫肛门部,可采集数个粪球。大量采集,使用代谢笼。

3.犬、猴、小型猪 采集自然排出的新鲜粪便或用棉签插入肛门采取少量粪便。


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