细胞的复苏

概述

复苏细胞与冻存的要求相反，应采用快速融化的手段。这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化。避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损害。

用品

培养液，吸管，离心管，培养瓶，带盖不锈钢罐。

步骤

(1) 将冻存管从液氮罐中取出，直接投入37℃温水中，并轻轻摇动令其内容物尽快融化。如果冻存管封闭不严，在保存过程中液氮进入其中，从液氮罐中取出时由于温度升高导致液氮急速气化而爆炸，冻存管爆裂的碎片可伤害面部等身体部位。因此，存取冻存管时都要佩戴防护眼镜和手套，冻存管投入存放温水的器皿中后应立即把盖子扣上，以防发生意外。

(2) 从37℃水浴中取出冻存管，用酒精消毒后开启，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并滴加10倍以上完全培养液，混合后低速离心，除去上清液，再重复用完全培养液漂离心洗1次。

(3) 用培养液适当稀释后，接种培养瓶，放入CO₂，培养箱静置培养，次日更换1次培养液，继续培养。如果复苏时细胞密度较高要及时传代。细胞复苏时细胞数可以做适当稀释，接种细胞密度以5 x10⁵/mL为宜。