心血管疾病用大体染色方法可直接将一些病变区特异地显示出来，如心肌梗死模型的梗死区、再灌注区。动脉粥样硬化模型的动脉斑块沉积区，经过大体染色后的组织标本还可用于光镜制片。

一、硫磺素-伊文蓝染色显示小型猪心肌梗死区

小型猪缺血-再灌注实验结束后，开胸器、组织剪迅速摘取实验猪心脏，向冠状动脉内注入4%硫磺素（thioflavin-S）1ml/kg，使再灌注区着色，梗死区不着色；后于球囊封堵处原位结扎前降支，再向冠状动脉内注入Evan蓝，使正常心肌着色。其后，用0.9%生理盐水洗净心腔内积血和染料，滤纸吸干沿心脏长轴以2mm为厚度标准，用10cm长刀片进行为5～6个心肌长度的短轴切片。取心脏乳头肌水平短轴切片，在可见光和紫外光下观察正常心肌显示蓝色，再灌注区心肌显示黄色，梗死区心肌不显色。选取与超声造影相似的切面进行拍照，用图像处理软件IPP6.0选取并测量再灌注区心肌面积（RA）梗死心肌面积（IA）和左心室心肌面积（LVWA），分别计算梗死区心肌面积/再灌注区心肌面积的比值（IA/RA）和再灌注区心肌面积/左心室心肌面积（RA/LVWA）的比值（图3-6-1～图3-6-4）。

二、小鼠主动脉剥离及主动脉粥样斑块大体染色方法

（一）ApoE小鼠主动脉及分支剥离方法

准备显微外科镊弯头、直头各一把，眼科剪一把，组织剪一把，组织镊一把，棉球若干。先摘眼球取血做相关生化指标检测，再行主动脉及其主要分支的取材。取材步骤如下：

1.将取完血液样本的小鼠用剪刀沿腹部正中剖开至胸骨角，暴露心脏，并自主动脉起始部开始解剖分离整个主动脉至腹主动脉的髂总动脉分叉处；在主动脉弓处向上分离左侧头臂干动脉和无名动脉。

2.分离过程中需剪掉肺叶，去除胸腺等。分离动脉过程要维持原来的解剖位置，待整个分离过程完成之后剪下所剥离的动脉。因发生动脉粥样硬化的动脉脆性增加，弹性变差，极容易剪破动脉，分离过程中操作尽可能轻巧，配合棉球轻轻擦拭进行分离，可以保证整个动脉的完整性。

3.对剪下的动脉标本进行修整，尽可能地去除动脉外膜的脂肪和结缔组织，防止染色后干扰对动脉粥样硬化斑块的评价。

4.将修整好的动脉标本，用生理盐水将血液冲洗干净，置固定液中保存，待染色。

（二）试剂配制

1.固定液 中性甲醛-蔗糖溶液（4%多聚甲醛，5%蔗糖，2ɥmol/L EDTA,pH 7.4）。

2.0.5%苏丹Ⅳ染色液配制 称取 0.5g苏丹Ⅳ，溶于50ml丙酮中，然后再加入70%乙醇50ml，混匀后用滤纸过滤后备用。

（三）染色操作步骤

在体视显微镜下，将主动脉沿长轴剖开，然后置苏丹Ⅳ染液中染色6min后，取出主动脉转入80%乙醇中脱色5min。染色过程中，应注意更换脱色液。同一份脱色液经多次使用后因混入苏丹Ⅳ染液致使脱色效果不佳，此时要更换使用新的脱色液。

（四）染色结果

苏丹Ⅳ染色将主动脉斑块染呈红色。

(五) 染色后主动脉展开暴露斑块的固定方法

食用土豆（长径大于所取动脉的长度），不锈钢（或其他材质）固定针（直径约0.2mm）不少于30根，显微外科镊（弯头或直头各一把），显微外科持针器（弯头或直头因操作者的习惯而选）一把。

1.将土豆用水洗干净并用刀切成厚约5mm的均匀切片。

2.将土豆切片置体式显微镜视野中央，调整焦距至视野清楚。

3.将主动脉标本置于土豆切片上，在体视显微镜视野中，运用显微外科镊将主动脉展平，并用显微外科持针器夹持固定针将主动脉逐段固定在土豆切片上。

4.土豆片可以根据使用情况随时更换，操作方便，省时省力，不必制作蜡盘。如果使用蜡盘固定主动脉，必须更换苏丹Ⅳ染液配方，使用不含丙酮的工作液，否则蜡会被丙酮溶解。

（六）图像采集

在体视显微镜下使用冷光源灯从不同方向照亮标本，使钢针在镜下不留影子，用图像采集工具进行照片采集。采集的照片可使用图像分析软件进行分析评价动脉粥样斑块情况（图3-6-5～图 3-6-7）。