脱水

（一）组织脱水目的

组织经固定后仍含有大量水分，以石蜡为包埋剂时，因水与石蜡不能混合，应在浸蜡包埋前用脱水剂（dehydrants）逐步地将组织内水分置换出来，有利于石蜡充分渗入组织内，这一过程称为脱水（dehydra-tion）。最常用的组织脱水剂是乙醇。乙醇可与水混合，脱水作用强，并且可硬化组织。乙醇穿透组织速度很快，对组织有明显收缩作用。为避免脱水过程中组织过度固缩，必须采用从低浓度到高浓度逐级升高的梯度乙醇依次脱水。不同脏器组织脱水程序不同，需经反复实践才能摸索出稳定性、重复性好的脱水程序。有关内容将在以后各章中述及。

（二）组织脱水注意事项

1.各级脱水乙醇要根据脱水组织量和脱水次数定期更换，保持所要求的准确浓度。

2.视组织结构及组织块大小设置脱水时间，在高浓度乙醇内脱水时间过长会使组织过度固缩，过硬、过脆不易制片。

3.组织超过3mm厚，组织标本数量多，脱水剂量少均会影响脱水剂对组织的渗透力，使组织内残留有水分，蜡包埋后组织块会出现发白区，切片时发“糠”。需再返回无水乙醇进行脱水，并更换原来的媒介剂二甲苯。

4.对脂肪丰富的组织应采用延长在各级乙醇内时间脱去脂肪。

透明

脱水完毕的组织块，应经过一种能与乙醇混合，同时又能溶解石蜡的媒介剂的作用，将不能与石蜡结合的脱水剂乙醇置换出来，从而达到石蜡浸入组织中的目的。在此进程中，媒介剂进入组织内其光折射指数接近于细胞蛋白的折光指数，使组织块变得透亮，此过程称为透明（clearing）。常用的媒介剂是二甲苯。组织在二甲苯中的时间不宜过长，否则可导致组织过度收缩硬化易碎裂。此外，氯仿、甲苯、苯也可作透明剂，其透明效果较弱但不易使组织碎裂。

常用媒介剂的种类及沸点（表2-3-6）。

浸蜡

组织经脱水透明后，为使组织硬度均一利于切片，要在熔化的石蜡包埋剂内浸渍，此过程称浸蜡。浸蜡的目的在于石蜡能充分浸入组织内形成组织块的支撑物，使组织具备一定的硬度和韧度，以保证能切出厚度满意的切片。一般需经过2～3次浸蜡过程才能完成。要注意蜡的质量与浸蜡温度（不超过62℃），常用的包埋剂是固体石蜡（熔点56~58℃或58~60℃）。

包埋

浸蜡后的组织块与熔化的石蜡固定成为均一硬度、易于切片的过程为包埋（embedding）。

（一）操作步骤（图2-3-17～图2-3-23）

1.向包埋盒内注入少量的熔化石蜡垫底。

2.从浸蜡容器中取出组织块放入包埋盒底部。

3.继续向包埋盒内注入石蜡淹没组织块。

4.将包埋盒移至制冷台上，用镊子轻轻将组织固定使包埋面贴平，待包埋盒内石蜡冷却固化。

5.从包埋盒中取下冷却固化的石蜡块。

6.用手术刀除去周围多余的石蜡。

（二）注意事项

1.组织与包埋盒底部贴平，使组织与蜡之间不留有空隙。

2.注意包埋方向：心、肝、肾、脂肪一般以组织最大面为包埋面；脑组织观察海马时，应以视交叉切面为包埋面；肌肉、脊髓、外周神经应同时包埋横断面和纵断面；血管、肠包埋时管腔尽量不要呈闭合状；皮肤、眼球壁包理面应与表层垂直。

3.石蜡温度不可高于62℃。特别是垂体、肾上腺组织，更要避免高温损伤。

4.仔细核对实验编号，对号入座。

脱水、透明、浸蜡、包埋流程关键要点

1.动物模型各脏器组织在乙醇与二甲苯混合液、二甲苯液中必须严格按照SOP时间。

2.动物模型的肝、脑组织要采用一套脱水、透明、浸蜡专用试剂，不要与其他脏器组织脱水试剂混用，包括浸蜡与包埋蜡都要采用专用试剂，以确保流程中所用各试剂浓度的准确性。一旦此系列试剂中含有水分或杂质，制片后的组织容易出现裂纹。

3.大鼠，小鼠肝组织浸蜡时间不能超过20min，蜡温控制在60℃左右（详见相应章节流程表）。小鼠脑组织浸蜡时间不能超过40min，蜡温控制在60℃左右（详见相应章节流程表）。

4.在脱水机上注明更换脱水、透明试剂日期，以备试剂定期更换新液，确保各脱水试剂的浓度准确性，或根据脱水组织块数量、脱水次数来确定更换的时间。也可用以下方法检测更换新液的时间：将各脱水试剂，滴入清水中，如变混浊呈乳白色且不易扩散有浓稠感时，应更换新液。

5.避免小组织丢失，脑垂体、肾上腺，细胞团块等小组织应用一次性口罩纸包好再放入脱水盒中，进入脱水流程。

6.选用优质的纯净蜡，包埋蜡含杂质多切片易出现划痕。