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细胞系组织来源的鉴定

[ 时间:2024-08-01 阅读:110次 ]

用于鉴定细胞系组织来源的方法有许多种,常用的有超微结构分析,细胞骨架及组织特异性蛋白质的免疫学分析,以及采用任何一种较广泛的组织细胞特异性功能的生化测定。

(一)具有特征性标志的超微结构分析

用电镜方法观察到的桥粒、角蛋白纤维一般被认为是上皮组织的特征,而Wei-bel-Palade小体则是内皮细胞的特点。朗格罕小岛细胞可通过其分泌的特殊颗粒而从形态学上进行鉴定。具体方法请参照培养细胞电镜观察方法。

(二)免疫学试验测定细胞骨架蛋白

细胞质内的中间丝蛋白质(IF)是组成细胞骨架的必要成分,它也是鉴定细胞特性的指标之一。至少5个亚组的丝状蛋白质的形态学、多肽组成的免疫学特征已被详细研究。这类蛋白质的分布具有组织类型的特异性。大多数组织的上皮细胞含有细胞角蛋白,间质细胞含有波形丝蛋白(vimentin,一种中间纤维成分),结蛋白(desmin)主要分布于肌细胞内,神经丝蛋白存在于神经元中,神经胶质纤丝酸性蛋白质存在于神经胶质细胞。

测定中间丝骨架蛋白质的方法有电镜、直接及间接免疫荧光染色法、免疫组化。具体方法详见培养细胞免疫组化染色技术相关章节。

(三) 组织特异性抗原的鉴定

目前已有许多关于组织或肿瘤特异性抗原分离和性质鉴定方面的报道。由于各实验室及所用细胞系及组织的不同,测定方面有一定的差异,在此仅介绍少数例子。

Ceriani及其同事报道,正常人体乳腺细胞及癌变乳腺细胞存在乳腺特异性抗原。他们用去脂人奶的样本免疫家免,用人红细胞吸收抗血清中的种属特异性抗体后,间接免疫荧光试验证明,抗血清中的抗体可特异性地结合于正常人乳腺细胞和乳腺癌细胞系的细胞上,放射免疫试验可定量测出细胞上所结合的抗体数量,7种乳腺肿瘤细胞系及原代培养的乳腺上皮细胞结合抗体的能力至少是胸部纤维细胞及其他来源的上皮细胞能力的10~40倍。MCF-7或MDA-MB-157经胰蛋白酶消化后其结合抗体的能力减小80%~85%说明乳腺特异性抗原是存在于细胞的表面。

Chu等人研究出从人体精液及前列腺组织中分离、纯化及定量分析前列腺抗原(PA)的方法,包括经硫酸铵粗提沉淀物,经溶解、透析,然后经层析柱(如DEAE和sephadex)进一步纯化,分子量在26000~37000的PA,经超滤作用,浓缩最后的制剂免疫家免。制备的血清与前列腺组织粗提物在免疫扩散试验中呈单一反应,与其他组织来源的样本无交叉反应。用酶联免疫分析PA所进行的定量研究表明,来源于人前列腺癌的细胞LNCaP和PC-3表达前列腺抗原。相反,其他组织来源的细胞系则不表达 PA。

一些实验室已经分离和鉴定出经杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体,具有较高的组织特异性。用杂交瘤细胞产生的单克隆抗体来区分人类B细胞、T细胞及T细胞亚群的方法也已有报道,有关试剂盒及试剂已成为商品。由于单克隆试剂盒的使用范围很广泛,未来鉴定来源于不同组织的细胞特性的试剂盒将可供实验室使用,而且有可能代替目前普遍采用的异种抗血清。

(四)细胞特殊功能的生化检查方法

许多细胞系和细胞株由于存在特异的合成功能或代谢途径,因而可用此来确证其来源的组织。如GH2细胞株,取自于脑垂体肿瘤,能释放生长激素到培养基中,并在重新接种到正常或垂体切除动物后能促进宿主的生长。来源于莱迪希细胞(间质细胞)瘤H10119,其在BALB/c小鼠体内维持生长,培养条件下这种细胞主要分泌黄体酮及其衍生物20-α-羟基4-孕烯-3-酮等甾族化合物。它们对促黄体生成激素无反应。但对cAMP的刺激则有反应。培养的鼠M-33和Y-1细胞株分别分离于一种clondman S91黑色素瘤以及肾上腺肿瘤。M-33细胞株如重新接种至适宜的宿主体内(如CXDBA动物)可导致黑色素瘤,而Y-1肾上腺细胞株则释放类固醇激素,而且对ACTH有反应。

(五) 细胞来源及特征数据的计算机化

目前,许多细胞系均保存在世界各地的细胞库及私人实验室中。多数情况下有关这些细胞系能否获得,及其特性等信息都未曾进行广泛的交流,对于杂交瘤细胞尤其如此,其原因在于这一新技术开发的重要性,以及每次融合所产生的杂交瘤细胞具有许多潜在的特征。

对于一个研究机构要进行库存、特性鉴定、分类及分发已有细胞系及杂交瘤细胞提供给其他机构,这一任务是很艰难的,也是不可能完成的。因此,许多科学家及组织建议发展含有全部细胞系信息的计算机信息库。这种细胞来源信息库(CSIB)的作用相当于各种特化的细胞系和杂交瘤细胞的信息情报交换所,不提供细胞也不签发证明文件。大多数情况下可直接自参加CSIB的科学家或实验室处去获得这些细胞及文件。

细胞系数据库(cell line database)也是近来才兴起的,它们的数量以及发展规模依据各机构投入资金的多少和需求的不同而有不同的计划。美国标准细胞库(ATCC)1977年大力支持此项计划,到目前已贮有17000种动物细胞系或株的来源信息,而且大多数已进行分类。有关这些数据信息可通过 DIAICOM 进行国际的查询。

其他国立细胞库包括设立于美国新泽西,Camden,Coriell医学研究中心的Hu-Genetic Mutant Cell Repository;由manPublic Health Laboratory Service, PortonDown,Salisbury,UK资助的European Collection of Animal Cell Cultures。日本东京用于癌症研究的,设立于National Insti-tute of Hygiene Services 的细胞库,也提供他们收集的细胞信息及特殊细胞培养的信息。


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