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RNA pull-down
更新时间: 2024-10-14 21:42
一、实验原理 RNA pull-down是一种用于研究RNA与蛋白质之间相互作用的实验技术。 RNA pull-down技术的基本原理是利用标记了生物素的RNA探针与细胞提取物中的RNA结合蛋白(RBP)结合,然后通过亲和层析方法(如链霉亲和素标记的磁珠)将RNA-蛋白质复合物富集并分离出来。之后,可以通过Western blot或质谱分析等方法来检测和鉴定与RNA相互作用的蛋白质。 二、实验流程 1. RNA探针的制备与标记: 设计并合成目标RNA序列。 通过体外转录法或化学合成法制备RNA探针,并在其末端进行生物素标记。 2. 细胞总蛋白提取: 从目标细胞或组织中提取总蛋白。 3. RNA与蛋白质结合: 将标记的RNA探针与细胞提取物混合,孵育以使RNA与蛋白质结合形成复合物。 4. 磁珠富集: 将链霉亲和素标记的磁珠加入混合物中,使RNA-蛋白质复合物与磁珠结合。 5. 洗涤: 洗涤去除非特异性结合的蛋白质。 6. 洗脱RNA结合蛋白: 从磁珠上洗脱结合的蛋白质。 7. 检测与鉴定: 通过Western blot分析检测特定的RNA结合蛋白。 或者通过质谱分析鉴定结合的蛋白质。 三、送样要求 RNA Pull down检测服务样品要求 建议选择顺丰快递,干冰运输,以避免样本降解。为保证样品及时处理,请避免样品在周末或法定节假日到达实验室。请在送样前与您的客户经理沟通样品送达时间。实验样品剩余样默认不做返还,请您注意保留备份。如需返还务必请在实验开展前书面说明并告知销售/技术支持,且样品返还可能会产生额外的运输费用。希望得到您的理解! 遵循这些实验原理和流程,以及送样要求,可以有效地进行RNA pull-down实验,并得到可靠的实验结果。