一、实验原理 酶联免疫吸附检测（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种灵敏的免疫分析技术，用于检测和定量样本中的特定抗原或抗体。 ELISA的基本原理涉及将抗原或抗体固定在固相载体上，并将抗原或抗体与酶标记的抗体或抗原结合。这一过程允许通过酶催化的颜色反应来检测样本中的目标分子。 ELISA技术因其高灵敏度、高特异性和易于自动化操作的特点，在临床诊断、生物研究和食品安全等领域得到广泛应用。它可以用于检测各种类型的分子，包括蛋白质、激素、病毒和细菌抗原等。 二、实验流程 1. 固相载体准备：将抗原或抗体固定在微孔板等固相载体上。这一步通常通过物理吸附或共价结合完成。 2. 封闭：为了减少非特异性吸附，使用封闭剂（如BSA或脱脂奶粉）覆盖固相载体表面。 3. 样本孵育：将待检样本加入微孔板中，样本中的待测抗原或抗体与固相载体上的配对分子反应。 4. 洗涤：孵育后，通过洗涤步骤去除未结合的样本成分。 5. 酶标记抗体/抗原孵育：加入酶标记的抗体或抗原，这些标记物与样本中的待测分子结合。 6. 洗涤：再次洗涤，去除未结合的酶标记抗体/抗原。 7. 底物添加：加入底物溶液，该底物能够被结合在固相载体上的酶催化转换成有色产物。 8. 显色反应：酶催化底物产生有色物质，显色反应的程度与样本中待测物质的量成正比。 9. 终止反应：在一定时间后，加入终止液停止酶的活性。 10. 定性或定量分析：通过肉眼观察、酶标仪测量吸光度（OD值）等方式，对产生的有色产物进行定性或定量分析，从而确定样本中待测物质的含量。 三、送样要求 1. 动植物组织样品（干冰运送）： 准确称量动物组织重量，按重量（mg）与容积（μl）1:9的比例添加9倍容积的匀浆物质（建议使用0.9%的生理盐水）。 使用匀浆机进行匀浆，制备成10%的匀浆料。 取上清液，使用干冰进行运输。 2. 血清、血浆样品（干冰运送）： 将样本分装并密封，存放于-20℃或-80℃的冰箱中，避免反复冻融。 使用干冰进行运输。 3. 细胞样本： 清除培养基，将离心后的细胞放入液氮或-80℃的冰箱中保存。 确保细胞总量不低于107个，使用干冰进行运输。