一、技术背景 单细胞技术聚焦于对单个细胞进行基因或转录层面的深入分析，它能够揭示细胞间的细微差异，为研究复杂组织内细胞的多样性提供高清晰度的视角。通过探究单个细胞独特的生物学特征，以及它们如何响应环境变化，这项技术有助于我们更深入地理解细胞的功能、分化过程、增殖动态以及肿瘤发生的内在机制。因其对生命科学领域的重大贡献，单细胞技术已经成为当前生命科学研究中的一个重要焦点。 二、简单介绍 潮新生物推出的10x Genomics单细胞3′转录组、10x Genomics单细胞3′转录组（抽核）、10x Genomics Flex单细胞转录组以及INVADE-seq都是目前流行的单细胞转录组测序技术。下面是这些技术的简单介绍： 1、10x Genomics单细胞3′转录组 原理：基于微流控技术将单个细胞与凝胶珠结合，并在每个凝胶珠上生成单个细胞的cDNA库。 特点：通量较高，可以一次性处理数千个细胞；检测基因表达时偏向于3’端，可能丢失一些基因信息。 应用：适用于需要中等通量和较高准确性的单细胞表达谱研究。 2、10x Genomics单细胞3′转录组（抽核） 原理：与上述技术相似，但专门用于处理细胞核，适用于难以获取完整细胞的样本。 特点：可以处理固定后的细胞核，适用于不能进行活细胞分离的样本；仍然偏向于3’端基因表达检测。 应用：适用于需要分析细胞核内基因表达的场景。 3、10x Genomics Flex单细胞转录组 原理：利用微流控技术结合分子标记，允许用户自定义实验设计，如检测细胞类型、基因表达、表面蛋白等。 特点：灵活性高，可以根据研究需求定制；可以同时检测基因表达和表面蛋白，提供更全面的数据。 应用：适用于需要高度定制化的单细胞分析，如同时分析细胞表型和基因表达。 4、INVADE-seq 原理：基于微流控技术和Tn5转座酶，将细胞与 beads 结合，进行转录组的测序。 特点：通量较高，可以处理大量的细胞；可以检测全长转录本，减少3’端偏差。 应用：适用于需要全长转录本信息的研究，以及对单细胞表达谱进行深度分析。 5、对比总结 通量：10x Genomics Flex和INVADE-seq通常具有更高的通量。 数据完整性：INVADE-seq提供全长转录本信息，而10x Genomics技术可能存在3’端偏差。 灵活性：10x Genomics Flex提供了更高的实验设计灵活性。 样本类型：10x Genomics单细胞3′转录组（抽核）适用于处理细胞核样本 三、送样要求 1. 新鲜组织样本： 组织离体后，立即使用PBS缓冲液冲洗以去除血液。 在20分钟内将组织块放入保存液中，建议组织块大小为黄豆粒大小（约300mg）。 将装有组织的保存液EP管用几层纱布包裹，并放入冰袋中进行运输。注意，装有组织的EP管不应直接接触冰袋，以避免温度过低对组织造成损害。 2. 血液样本： 使用带有紫色帽的5ml EDTA抗凝管采集血液，确保采血体积大于2ml。 如果需要过夜存放，可以将样本放置在室温（约25度）下。第二天使用碎冰或冰袋进行运输。 运输时，确保抗凝管密封良好，以防泄漏。 3. 细胞样本： 准备大于0.5-10^5个细胞，细胞浓度在700-1200个cell/ul之间，活细胞率需超过80%，结团率低于10%，细胞直径小于40um，且尽量减少细胞碎片。 将细胞重悬于含有血清的缓冲液中（注意缓冲液中不能含有钙镁离子和EDTA），以确保细胞在运输过程中的稳定性和活性。 使用碎冰或冰袋对装有细胞的样本进行运输，以维持细胞的低温状态，避免细胞活性下降。 以上处理和运输步骤旨在确保样本在采集后能够保持最佳状态，直至进行进一步的分析或实验。