一、实验原理 普通PCR（聚合酶链式反应）是一种用于在体外扩增特定DNA片段的技术。PCR的原理是基于DNA复制的过程，主要利用DNA模板、引物、四种脱氧核糖核酸三磷酸（dNTPs）和DNA聚合酶来扩增特定的DNA片段。PCR反应包括三个基本步骤：变性、退火和延伸。 变性：将DNA模板加热至94-98°C，使双链DNA解旋为单链，以便后续的引物结合。 退火：将温度降低至50-65°C，使引物与各自的互补序列结合。 延伸：在72°C左右，DNA聚合酶开始从引物的3’端开始合成新的DNA链。 二、实验流程 1. 样本准备： 组织样本：将组织样本匀浆化，使用DNA提取试剂盒提取DNA。 细胞样本：收集细胞，使用裂解缓冲液裂解细胞，提取DNA。 血液样本：使用EDTA抗凝管收集血液，提取DNA。 2. DNA纯化与定量： 对提取的DNA进行纯化，去除杂质和蛋白质。 使用分光光度计或荧光定量PCR仪对DNA进行定量。 3. PCR反应混合物的准备： 在PCR管中加入PCR反应缓冲液、dNTPs、引物、模板DNA和DNA聚合酶。 4. PCR扩增： 将PCR管放入PCR仪器中，按照预定的程序进行变性、退火和延伸的循环。 循环次数通常为25—35次，具体取决于目标片段的大小和扩增效率。 5. PCR产物的分析： 扩增后的PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进行分析，以确认扩增是否成功以及产物的纯度和大小。 6. 数据记录与报告： 记录实验结果，包括PCR产物的电泳图和大小。 根据实验结果撰写报告。 三、送样要求 1. 样本类型：组织、细胞或血液。 2. 样本保存：DNA样本通常需要在-20°C或-80°C下保存，并在运输过程中使用干冰或冰袋。 3. 样本纯度：要求提取的DNA样本足够纯净，无蛋白质、脂质或其他杂质污染。 4. 样本浓度：DNA浓度应适合PCR反应，通常在10-100 ng/µL范围内。 5. 避免降解：确保在样本处理和运输过程中避免DNA的降解。 6. 标签和记录：每个样本应清晰标记，并记录相关信息，如样本来源、提取日期和纯度等。